乳糖(Lactose)为4-O-β-D-吡喃半乳糖基-D-葡萄糖一水合物，是D-葡萄糖与D-半乳糖以β-1,4键结合的二糖，又称为1,4-半乳糖苷葡萄糖[1]。乳糖是制药行业最为常用的辅料之一，作为药物的赋形剂、填充剂广泛应用于口服、直肠、阴道等给药途径[2]。中国药用辅料发展联盟药用乳糖市场调研报告显示，目前，医药制剂和食品加工行业对乳糖的总市场需求将继续增加，对乳糖产业升级和产品创新的需求将更加旺盛。所以，可靠、完善、经济、快速的质量标准保证乳糖的质量对乳糖的安全使用具有重要的意义。
在进行乳糖品种2023年国家药品评价性抽验时，我们发现现行《中国药典》乳糖品种含量测定的法定检验方法(高效液相色谱-示差折光检测器法)成本高、周期长。因此，考虑利用乳糖的旋光特性，建立一种新的乳糖含量测定方法。近年来旋光法已在国内外药典中用于多个品种的含量测定，在《中国药典》中，果糖、葡萄糖注射液、右旋糖酐20氯化钠注射液等多个品种，均采用旋光法进行含量测定[3-5]。USP-NF、JP中，同样有一些品种采用旋光法进行含量测定，如葡萄糖、果糖等[6-8],证明旋光法作为含量测定方法，一直受到官方标准的认可，可作为一种质量控制的有效检测方法。虽然旋光度测定含量时存在专属性不强的局限性，但是乳糖的国家评价性抽验法定检验和探索性研究结果均显示，目前国内市场上的药用乳糖中杂质量很少，有关物质和炽灼残渣均不大于0.1%。这说明，采用旋光度法测定乳糖含量是可行的。因此，在此基础之上，我们尝试采用旋光法测定乳糖的含量，以降低测试成本，缩短测试时间，满足质量控制需求。
1 仪器与试药
1.1 仪器
MPC-300自动旋光仪；电子天平。
1.2 试剂与试药
试剂：氨试液；水(Milli-Q超纯水)。
试药：乳糖精制品(批号：2301001,来源：江苏道宁药业有限公司，包装：20 g/袋*25袋);141批次乳糖均为2023年度国家药品评价性抽验样品，涉及8家生产企业(用A至H表示生产企业)。
2 方法的建立与分析
2.1 乳糖精制品的选取
要建立用于乳糖含量测定的旋光法，需要首先测得纯品乳糖的比旋度以计算得到校正系数，因此我们委托江苏道宁药业有限公司制备了一批乳糖精制品，用于校正系数的确定。
2.2 乳糖精制品纯度的测定
采用质量平衡法测定了乳糖精制品(按无水物计)的纯度：
纯度(%)=(1-有关物质的含量-炽灼残渣的含量)×100%
按照《中国药典》2020年版四部乳糖品种项下炽灼残渣、水分的相应方法测定得：乳糖精制品水分为：5.208%,炽灼残渣(按无水物计)为：0.073%。我们采用本课题组之前建立的基线波动小、高灵敏度的高效液相色谱-电喷雾检测器法测定乳糖的有关物质[9],测定得有关物质(按无水物计)为：0.053%,根据质量平衡法，计算得到乳糖精制品(按无水物计)的纯度为：99.874%。
2.3 乳糖精制品比旋度的测定
随机抽取乳糖精制品10袋，分别从每袋包装里取两份样品，每份约5 g, 精密称定，加水40 mL并在50 ℃水浴加热至溶解，冷却后，加氨试液0.2 mL,静置30 min, 用水稀释至50 mL,依法测定(《中国药典》2020年版四部通则0621)。表1是20组平行实验数据，本
表1乳糖精制品比旋度值
|
编号 |
称样量(g) |
平均旋光度(°) |
比旋度(°) |
|
1-1 |
5.000 4 |
5.251 |
55.39 |
|
1-2 |
5.000 3 |
5.261 |
55.50 |
|
2-1 |
5.000 3 |
5.242 |
55.29 |
|
2-2 |
5.008 0 |
5.240 |
55.19 |
|
3-1 |
5.003 2 |
5.252 |
55.37 |
|
3-2 |
5.009 6 |
5.266 |
55.44 |
|
4-1 |
5.008 5 |
5.257 |
55.36 |
|
4-2 |
5.006 7 |
5.250 |
55.31 |
|
5-1 |
5.004 5 |
5.304 |
55.90 |
|
5-2 |
5.005 9 |
5.259 |
55.42 |
|
6-1 |
5.003 4 |
5.256 |
55.41 |
|
6-2 |
5.003 9 |
5.259 |
55.44 |
|
7-1 |
5.001 0 |
5.252 |
55.39 |
|
7-2 |
4.994 8 |
5.245 |
55.39 |
|
8-1 |
5.009 5 |
5.264 |
55.42 |
|
8-2 |
5.000 6 |
5.243 |
55.31 |
|
9-1 |
5.009 4 |
5.262 |
55.41 |
|
9-2 |
5.009 6 |
5.266 |
55.45 |
|
10-1 |
5.005 0 |
5.269 |
55.53 |
|
10-2 |
5.009 0 |
5.267 |
55.46 |
2.4 校正系数的计算
采用外标法计算含量时：
2.5 乳糖含量的计算
2.6 拟定的方法
【含量测定】取本品10 g, 精密称定，置100 mL量瓶中，加80 mL的水加热至50 ℃溶解，冷却后，加氨试液0.2 mL,静置30 min, 用水稀释刻度，摇匀，依法测定旋光度(通则0621),与1.802 1相乘，即得供试品中C12H22O11的质量(g)。
2.7 方法学验证
2.7.1 线性考察
分别取乳糖精制品约5、8、10、12、20 g, 精密称定，加80 mL的水并在50 ℃水浴加热至溶解，冷却后，加氨试液0.2 mL,静置30 min, 用水稀释至100 mL。按《中国药典》2020年版四部通则0621,测定乳糖精制品溶液的旋光度，以浓度为横坐标，旋光度为纵坐标，进行线性回归，回归方程为：Y=26.199 5X+0.023 1,r=1.000 0。结果表明，乳糖在0.05～0.20 g·mL-1范围内与旋光度呈良好的线性关系，线性回归见图1。
图1乳糖含量测定线性图
Fig.1Linear graph for lactose content determination
2.7.2 重复性
取同一批次乳糖6份，每份约5 g, 精密称定，分别置50 mL量瓶中，加40 mL的水并在50 ℃水浴加热至溶解，冷却后，加氨试液0.1 mL,静置30 min, 用水稀释至刻度，摇匀。按《中国药典》2020年版四部通则0621,测定旋光度并计算乳糖的含量。6次测定结果，乳糖含量的平均值为99.45%,RSD为0.07%。说明本法重复性良好。
2.7.3 稳定性
取线性关系项下的0.20 g·mL-1溶液，分别在0,4,8,12,24 h依法测定旋光度，结果RSD为0.52%。说明溶液在24 h内稳定。
2.8 样品的测定
按“2.6”中拟定的方法测定141批次样品的旋光度，并计算含量(表2)。
3 旋光法与HPLC-RID法测定乳糖含量的等效性研究
分别在国家药品评价性抽验的法定检验和探索性研究过程中，使用HPLC-RID法和旋光法对来自8家生产企业的141批次乳糖含量进行了测定，这些样品可以反映目前制药企业生产中使用乳糖的实际情况，具有代表性。
根据计算，旋光度法测得的141批乳糖含量与法检结果比较(表2),相对偏差均不大于1.0%,这证明旋光法测定含量时，准确度和HPLC-RID法是相当的。
表2旋光法与HPLC-RID法乳糖含量测定结果(%)
|
厂家 |
样品数(sample number) |
旋光法(polarimetry) |
HPLC |
同批样品间相对偏差范围(range of relative deviation between the same batch of samples) |
|
A |
17 |
99.2～100.1 |
99.0～101.2 |
0.1～0.8 |
|
B |
42 |
99.3～100.4 |
98.8～101.5 |
0.0～1.0 |
|
C |
26 |
99.4～100.2 |
99.3～100.9 |
0.0～0.7 |
|
D |
17 |
99.3～100.4 |
99.2～101.2 |
0.0～0.7 |
|
E |
2 |
99.3～99.5 |
99.1～99.9 |
0.2～0.3 |
|
F |
5 |
99.3～99.7 |
99.9～100.9 |
0.2～0.6 |
|
G |
30 |
99.9～100.3 |
99.2～100.8 |
0.0～0.7 |
|
H |
2 |
99.7～99.8 |
100.2～101.3 |
0.2～0.8 |
在此基础上，我们采用统计学方法，对两种方法的等效性进一步评估。单因素方差分析(One-Way ANOVA)检验结果显示(表3),两组数据无显著性差异(Sig.>0.05)。这表明新建立分析方法与药典方法性能相当，是等效的。
表3单因素方差分析检验结果
|
方差分析(ANOVA) |
含量(旋光法)(content (polarimetry)) |
|
平方和(sum of squares) |
自由度(df) |
均方(mean square) |
组间均方/组内均方(F) |
显著性(Sig.) |
|
组间(between groups) |
1.101 |
26 |
0.042 |
0.675 |
0.876 |
|
组内(within groups) |
7.146 |
114 |
0.063 |
|
|
|
总计(total) |
8.247 |
140 |
|
|
|
旋光法测定乳糖的含量，结果准确，重复性好，操作简便快捷，同时，采用水作为溶剂，经济、绿色、环保。此外，通过等效性研究，其与《中国药典》2020年版四部中HPLC-RID法性能相当。作为乳糖含量测定的一种有效方法，可以为乳糖质量控制过程中的含量测定，提供除《中国药典》2020 年版四部中高效液相色谱-示差折光检测器法外一种新的选择。
发布时间：2025-12-10 
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